靶蛋白制备及其与中药分子相互作用分析功能单元

发布时间:2024-11-17 浏览人数:1103

  针对已确定的具有重要药物靶点价值的蛋白,发掘及验证与其有相互作用的中药复方成分或单体分子,将这些成分的分子作用机制精准锚定在关键靶蛋白节点上,对于中药药效机制阐释和新药研发都具有重要的价值。免疫学实验室以分子相互作用金标准分析系统——Biacore T200为核心,辅以大肠杆菌及哺乳动物细胞表达系统、重组蛋白高端纯化及分析设备AKTA avant 25系统、BIO-RAD ChemiDocTM高灵敏度成像系统以及其它相关仪器设备,打造了一整套靶蛋白制备及其与中药分子相互作用分析的实验体系。

  1、Biacore T200分子相互作用分析实验

  Biacore系列产品是分子间相互作用检测领域研发最早、性能最好、市场占有率最高的检测设备,其技术被认为是分子互作检测领域的金标准技术,被中国、美国和日本药典所收录,利用其发表的文章年均>1000篇。T200型号被认为是Biacore系列中最经典型号之一,具有超高灵敏度、超高数据质量、超低样本消耗和独特“分子垂钓”功能。它是基于表面等离子体共振(surface plasmon resonance,SPR)技术来实时跟踪生物分子间的相互作用。其技术特点为实时、无任何标记地测量活性分子之间相互作用,噪音小,基线噪音值非常低,并对被检测物无分子量检测下限,既能够检测大分子也能够检测小分子,满足中药分子和靶蛋白的分子量需求。Biacore T200在中医药研究中具有非常广泛的应用,在中药作用机理解析、中药复方活性成分确认、中药活性成分分离与确认、基于靶点的药物筛选、药靶结合位点验证、靶点发现与确认等方面已成为不可或缺的研究设备。

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  2、重组蛋白表达与纯化实验

  免疫学实验室已建立完备的大肠杆菌重组蛋白表达体系以及哺乳动物细胞重组蛋白表达体系,并拥有AKTA蛋白纯化仪的高端版本AKTA avant 25系统。该设备可以同时接驳5个层析柱,做到配液、进样、收集、分析全自动化,特别适合蛋白纯化条件优化的探索工作。基于该设备和全套预装的离子交换柱、分子筛、疏水柱,可快速开展生物大分子的高分辨率的纯化,并完成从实验室基础研究到整个工艺方法快速开发及放大。目前实验室已经完成了一系列天然蛋白质和重组蛋白的纯化制备工作,纯化后的蛋白可作为活性靶蛋白用于Biacore分子间相互作用研究之中。

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  3、ChemiDocTM高灵敏度成像实验

  基于冷CCD技术的Bio-Rad全新一代的高灵敏度化学发光成像系统ChemiDocTM在化学发光成像领域拥有更广的动态范围、更高的检测灵敏度,比传统的压片扫描更快速简便,可有效的检测低丰度蛋白。在Western Blot检测应用中,其可以自动优化曝光、自动对焦;成像曝光时间可以累积,避免反复曝光;可以挑选最中意图像保存;具有与胶片相媲美的灵敏度,形成高质量的图像;操作简便,可简单进行可靠的定量分析。利用其配套化学发光试剂盒,样品蛋白质条带电泳结束之后还可以直接成像,无需固定、染色和脱色。

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