发布时间:2024-11-17 浏览人数:1100
通过人为方式将目标基因导入靶细胞不仅是科学研究领域重要的技术手段,而且是CAR-T、CAR-NK等肿瘤细胞治疗产业中的关键环节。在诸多基因导入手段如脂质体转染、阳离子聚合物转染、病毒侵染、电穿孔等技术中,电穿孔法作为物理方法,具有高效、可适用细胞广泛、特别适合于其它方式难于基因导入的淋巴细胞、干细胞、原代细胞等细胞,同时还具有过程短、成本低、可大规模转染等优点, 是细胞基因导入的最优选择。免疫学实验室拥有电穿孔技术第一品牌Lonza的小规模细胞转染设备Lonza Nucleofector™ 2b电穿孔仪以及大规模、高通量细胞转染设备Lonza AMAXA 4D-Nucleofector™ LV电转仪,将其组成全方位、多层次细胞基因导入系统,并利用BD A1多色流式细胞分析仪及FACSAria™ II流式细胞分选仪组成基因导入分析、分选系统,辅以其它常规仪器设备,形成一整套高效、多用途的细胞基因导入及分析分选实验体系。
1.细胞电穿孔实验
Lonza独创的核转染技术(Nucleofection)不仅使得DNA、RNA等转染物质可以进入细胞质,还可直接通过核膜进入细胞核。其对质粒DNA转染效率高达90%,寡核苷酸(如siRNA)转染效率高达99%,面世20年来,已成功转染>1200种细胞系、>130种原代细胞,并在干细胞、免疫细胞、神经细胞等各类较难转染的细胞以及外泌体均获得了优秀的转染效果。凭借此技术,Lonza系列转染设备成为目前最高效的电转化系统之一。
4D-Nucleofector™ LV是Lonza公司针对大规模转染所设计设备。它利用类似于流式细胞进样的技术,边流动边转染,实现全封闭、可拓展的大规模转染,在几分钟内可完成109细胞数量的基因导入,转染效率高,被导入细胞保持高活力。该大规模、高通量转染设备是CAR-T、CAR-NK肿瘤细胞治疗,CHO、293细胞表达蛋白,高容量细胞展示库构建等实验应用的最佳设备。
Lonza Nucleofector™ 2b为Lonza公司开发的实验室常规转染设备。它结合传统的电穿孔技术及专利的细胞特异性细胞核转染液,直接把外源基因导入原代细胞和传代细胞的细胞核中。该设备特别适用于转染原代细胞、悬浮细胞和难以转染的细胞系,如T、B淋巴细胞、NK细胞及PC-12细胞系等。
2.多色流式细胞分析实验
BD FACSymphony A1流式细胞仪包含4台高功率100mW激光器:405nm紫色固态激光器、488nm 蓝色固态激光器、640nm红色固态激光器、561nm黄绿色固态激光器。可同时支持最多16种颜色或19个参数的实验。其样本包括:(1)细胞类:各种动物细胞(如外周血,骨髓,细针穿刺,体腔灌洗液,实体组织,悬浮或贴壁培养的细胞)、植物细胞、浮游生物、微生物、酵母;(2)人工合成微球;(3)血清、血浆、培养上清、细胞裂解液中的可溶性蛋白(CBA技术)。其检测指标包括(1)细胞结构:细胞大小、细胞颗粒度、细胞表面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、RNA含量、蛋白质含量等;(2)细胞功能:细胞表面/胞浆/核的特异性抗原、细胞活性、细胞内/外的细胞因子、激素结合位点、细胞受体、蛋白磷酸化、pH值、钙离子浓度、细胞膜电位、线粒体膜电位等。
3.流式细胞分选实验
FACSAria™ II流式细胞分选仪是集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。该设备包含2台高功率激光器:488nm 蓝色固态激光器、633nm红色固态激光器可同时支持最多7种颜色或9个参数的实验;有四种尺寸喷嘴(70um,85um,100um和130um)供用户分选不同大小的样本颗粒;支持两路/四路分选方式;分选速度:70,000事件/秒;提供从1.0 mL的微量管至15 mL的离心管等多种上样管固定架。
设备的分选功能可通过流式分析将特定的目标群体分选后进行培养研究、为PCR、FISH等分子技术提供纯度较高的特异性细胞群。分选结果可减少研究中的干扰因素,获得更准确的实验结果。